以下便是土壤DNA提取試劑盒的原理與操作
發(fā)布日期:2022-05-28 瀏覽次數(shù):1176
土壤的成分包括礦物質(zhì)、粘土等無(wú)機(jī)物、植物及植物的體、腐殖物質(zhì)等土壤有機(jī)物以及在土壤中存在的微生物。
從土壤中提取的DNA,是微生物、動(dòng)植物體等的總DNA,同時(shí),腐殖物質(zhì)的性質(zhì)與DNA很相似,DNA提取過(guò)程中會(huì)將腐殖等物質(zhì)一起純化,采用傳統(tǒng)的DNA提取方法來(lái)除去腐殖物質(zhì)等抑制因子是十分困難的。而這些腐殖物質(zhì)會(huì)抑制聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及限制性酶切等。因而,從土壤中提取DNA,腐殖物質(zhì)等抑制因子的除去干凈是重中之重。某公司根據(jù)腐殖物質(zhì)等特點(diǎn),發(fā)明了高效的腐殖酸吸附劑,再與硅膠柱純化的技術(shù)結(jié)合,開(kāi)發(fā)出了高效土壤DNA提取試劑盒(SoilDNAKit),已為廣大客戶所采用,*替代價(jià)格昂貴的進(jìn)口產(chǎn)品。
土壤樣品加入懸浮緩沖液BufferC1,并加入玻璃珠與利的腐殖酸吸附劑BufferC2,渦旋使土壤充分重懸,腐殖物質(zhì)充分釋放,讓吸附劑有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液BufferC3并渦旋在玻璃珠的摩擦作用下,裂解土壤中的所有生物包括G+細(xì)菌、酵母菌、真菌、藻類(lèi)、線蟲(chóng)甚至真細(xì)菌的孢子、芽孢、動(dòng)植物體等,游離DNA。之后,再加入沉淀劑BufferC4,離心沉淀除去土壤殘?jiān)?、吸附有腐殖酸的吸附劑、多糖多酚、絕大部分的色素等,獲得清亮的、含有DNA的上清,上清加入異丙醇沉淀獲得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后,再加入BufferC5離心進(jìn)一步除去腐殖酸等雜質(zhì),獲得上清,往上清加入乙醇后轉(zhuǎn)移到硅膠純化柱中過(guò)柱吸附DNA,除去雜質(zhì)。再加入漂洗液BufferWB離心進(jìn)一步除去蛋白質(zhì)、腐殖酸等雜質(zhì),加入漂洗液DNAWashBuffer除去鹽分等。干燥柱子后加入滅菌去離子水后,離心獲得高純的DNA。